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“做miRNA下调,QPCR检测miRNA,表达水平无变化”如何解决呢?反义核酸是在转录后水平发挥功能,要阻断miRNA的产生,理想情况是在生成成熟的miRNA之前阻断。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能实现,Cas9通过在pre-miRNA序列中引入突变,从而破坏miRNA表达,是miRNA基因功能缺失研究的一种新方法。福建肖老师运用Cas9技术,针对miR-21基因设计sgRNA ,通过慢病毒递送细胞,并在RNA水平检测到mir-21的下调表达,从而研究出miR-21耗竭对CNE2鼻咽(NPC)细胞生物学特性及其潜在机制的影响。使用Cas9敲除miR-21之后,功能上也呈现出阳性,此外,温医大医院的张老师使用Cas9敲除mir-545,研究了人环状RNA PRKCI(circPRKCI)通过抑制miR-545显示致性,促进人类神经胶质瘤细胞的病理进展3。所以,CRISPR / Cas9对于miRNA的KO是有效的、被认可的、且以QPCR检测表达量完全没有问题。瑞普信生物技术有限公司专做第三方检测ELISA实验。AAV载体第三方检测公司推荐
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定量实时聚合酶链反应(qPCR)广用于特异性核酸的第三方检测,RNA转录物丰度的测量和高通量实验结果的验证。qPCR通常在标准的96孔板上进行,现在实验室里的qPCR就像移液器和烧杯那样常见。在引物设计和功能分析方面,NCBI里的数据已经很多了。但这些数据只是理论上的,在具体实验操作中还要经过各种复杂的计算和实验。在以前的qPCR中,为了使测定正常进行,通常需要进行大量耗时的反复试验。而现在,这些步骤都可以通过数据预实验来完成。更方便的是,已经有人把qPCR实验中所用到的各种工具都整合到了一个工具箱里。比如,Biosearch这个网站里,就有一个成套的qPCR工具箱OligoToolbox,其中包含的工具能做很多实验计算工作。重庆真实数据第三方检测
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